Priony w moczu pacjentów z wariantową chorobą Creutzfeldta-Jakoba AD 6

Pokazano wyniki dla rund 1, 3, 5 i 7, jak również wyniki bez amplifikacji. Ścieżka 6 pokazuje próbkę moczu ze zdrowej kontroli, ścieżka 7 pokazuje marker masy cząsteczkowej, a ścieżka 9 pokazuje normalny homogenat mózgu nietraktowany przez proteinazę K. Ścieżka 8 pokazuje próbki moczu ze zdrowej kontroli uzupełnionej 10-5 rozcieńczenie wariantu homogenatu mózgu choroby Creutzfeldta-Jakoba. Wszystkie próbki traktowano proteinazą K, z wyjątkiem NBH stosowanego jako kontrola migracji PrPC. W pierwszej próbie wykrycia PrPSc w moczu, próbki uzyskane od pacjentów z różnymi postaciami pasażowalnych encefalopatii gąbczastych, jak również od osób z innymi chorobami neurodegeneracyjnymi i zdrowymi kontrolami, zostały zatężone i przeanalizowane za pomocą analizy Western po trawieniu proteinazą K. Wyniki pokazały, że nawet po zatężeniu 100 razy nie wykryto żadnego sygnału białka prionowego opornego na proteazę w żadnej analizowanej próbce (ryc. S1A w dodatkowym dodatku). Aby dalej próbować wykryć PrPSc w ludzkim moczu, zastosowaliśmy technikę PMCA. Najpierw zoptymalizowaliśmy metodę, wykorzystując próbki moczu od osób zdrowych, które zostały uzupełnione różnymi rozcieńczeniami wariantowego homogenatu mózgu choroby Creutzfeldta-Jakoba, w zakresie od 10-5 do 10-12. Po jednej i dwóch rundach 96 cykli PMCA, mogliśmy wykryć ludzki PrPSc przy rozcieńczeniu homogenatu mózgu 10-10 i 10-12, odpowiednio (Figura 2A). Nie wykryto PrPSc nawet po siedmiu rundach PMCA w próbkach moczu, które uzupełniono 10% zdrowym homogenatem mózgu (ryc. S1B w dodatkowym dodatku).
Wykrywanie PrPSc w moczu pacjentów z wariantową chorobą Creutzfeldta-Jakoba
Tabela 1. Tabela 1. Próbki moczu, które były pozytywne dla Wykrywania PrPSc według PMCA, według grupy badawczej. Następnie wykorzystaliśmy PMCA do wykrywania PrPSc w próbkach moczu pobranych od 238 osób (tabela 1), w tym 68 pacjentów ze sporadyczną chorobą Creutzfeldta-Jakoba, 14 pacjentów z wariantową chorobą Creutzfeldta-Jakoba (tabela S1 w dodatkowym dodatku), 4 pacjentów z formy genetyczne pasażowalnych encefalopatii gąbczastych (3 pacjentów z zespołem Gerstmanna-Sträusslera-Scheinkera i z rodzinną chorobą Creutzfeldta-Jakoba), 50 pacjentów z innymi chorobami neurodegeneracyjnymi, 50 pacjentów z nieegeneracyjnymi chorobami neurologicznymi oraz 52 osoby zdrowe. Wszyscy pacjenci i zdrowi kontrole byli homozygotyczni wobec metioniny w kodonie 129 129 PRNP.
Figura 2B pokazuje wyniki niektórych analizowanych próbek. Spośród wszystkich próbek badanych w sposób zaślepiony, tylko ten otrzymany od pacjenta z wariantem choroby Creutzfeldta-Jakoba (ścieżka 3 na Figurze 2B) był dodatni dla PrPSc, oprócz próbki kontroli pozytywnej (ścieżka 9 na Figurze 2B) składającej się z moczu z zdrową kontrolę, która została uzupełniona rozcieńczeniem 10-5 wariantu homogenatu mózgu choroby Creutzfeldta-Jakoba
[przypisy: frezy do paznokci, promocja zdrowia w pracy, castingi dla dzieci ]

Powiązane tematy z artykułem: castingi dla dzieci frezy do paznokci promocja zdrowia w pracy