Priony w moczu pacjentów z wariantową chorobą Creutzfeldta-Jakoba AD 3

PMCA został z powodzeniem zastosowany do wykrywania PrPSc u dotkniętych gatunków, w tym u ludzi.22 Badaliśmy, czy PrPSc jest obecny w moczu pacjentów z wariantem choroby Creutzfeldta-Jakoba i czy można go wykryć za pomocą PMCA. Badanie moczu jest najmniej inwazyjnym rodzajem pobierania próbek w celu wykrycia markera choroby, a mocz wykazał niewielkie ilości zakaźnego PrPSc w eksperymentalnych modelach zwierzęcych.20,23-26 Metody
Pacjenci i nadzór nad badaniem
Przeanalizowaliśmy próbki moczu pobrane od 68 pacjentów ze sporadyczną chorobą Creutzfeldta-Jakoba i 14 pacjentów z wariantową chorobą Creutzfeldta-Jakoba (informacje kliniczne na temat tych pacjentów podano w Tabeli S1 Dodatku Uzupełniającego, dostępnej wraz z pełnym tekstem tego artykułu), jak również 4 pacjentów z genetycznymi chorobami prionowymi, 50 pacjentów z innymi zaburzeniami neurodegeneracyjnymi (w tym z chorobą Alzheimera, chorobą Parkinsona, otorą czołowo-skroniową, chorobą neuronów ruchowych i postępującym porażeniem nadjądrowym), 50 pacjentów z neuronowymi zaburzeniami nieegeneracyjnymi (w tym choroba naczyń mózgowych, stwardnienie rozsiane , epilepsja, guzy mózgu, autoimmunologiczne zapalenie mózgu, zapalenie opon mózgowych, mieloradiculopatia i neuropatia obwodowa) i 52 osoby zdrowe. Rozpoznanie ludzkiej pasażowalnej encefalopatii gąbczastej u wszystkich pacjentów (z wyjątkiem pacjenta z wariantową chorobą Creutzfeldta-Jakoba) potwierdzono patologicznie podczas autopsji lub biopsji tkanki mózgowej, tkanki limfatycznej lub obu. Rozpoznanie innych chorób neurologicznych ustalono na podstawie badań klinicznych, a także badań obrazowych i laboratoryjnych, jeśli są dostępne. Wszyscy pacjenci i kontrole biorący udział w badaniu byli homozygotyczni pod względem metioniny w kodonie 129 genu kodującego białko prionowe (PRNP) (genotypowanie PRNP opisano w Dodatkowym dodatku). Mocz pobierano w różnym czasie w okresie objawowym chorób i trzymano zamrożone w temperaturze -80 ° C aż do analizy.
Metody zbierania moczu i analizy genetycznej zostały zatwierdzone przez instytucjonalne komisje przeglądowe w ośrodkach badawczych autorów, a wszyscy uczestnicy badania wyrazili pisemną, świadomą zgodę. Sponsorzy nie mieli żadnej roli w projektowaniu badania, gromadzeniu i analizie danych, przygotowaniu manuskryptu ani decyzji o przesłaniu go do publikacji.
Przetwarzanie moczu
Aby próbować bezpośrednio wykryć PrPSc za pomocą Western blotting, ml każdej próbki moczu zatężono za pomocą wirowania z dużą prędkością (100 000 xg przez godzinę w 4 ° C). Supernatant odrzucono, a peletki przemyto solą fizjologiczną buforowaną fosforanem. Po przemyciu peletki ponownie zawieszono w 10 .l soli fizjologicznej buforowanej fosforanem
[podobne: agencja hostess, kotwy do drzwi, Azeloglicyna ]

Powiązane tematy z artykułem: agencja hostess Azeloglicyna kotwy do drzwi