Nieswoiste zapalenie jelit i mutacje wpływające na receptor interleukiny-10

Molekularna przyczyna zapalnych chorób jelit jest w dużej mierze nieznana. Metody
Przeprowadziliśmy analizę wiązania genetycznego i sekwencjonowanie genu kandydata na próbkach pochodzących z dwóch niespokrewnionych rodzin pokrewnych z dziećmi dotkniętymi wczesną chorobą zapalną jelit. Przebadaliśmy sześciu dodatkowych pacjentów z wczesnym zapaleniem jelita grubego pod kątem mutacji w dwóch kandydujących genach i przeprowadziliśmy testy funkcjonalne w komórkach jednojądrzastych krwi obwodowej pacjentów. Przeprowadziliśmy allogeniczny hematopoetyczny przeszczep komórek macierzystych u jednego pacjenta.
Wyniki
U czterech z dziewięciu pacjentów z wczesnym zapaleniem jelita grubego zidentyfikowaliśmy trzy odmienne homozygotyczne mutacje w genach IL10RA i IL10RB, kodujących odpowiednio białka IL10R1 i IL10R2, które tworzą heterotetramer w celu utworzenia receptora interleukiny-10. Continue reading „Nieswoiste zapalenie jelit i mutacje wpływające na receptor interleukiny-10”

Połączony niedobór odporności związany z mutacjami DOCK8 ad 8

Co więcej, niezależne odkrycie mutacji dock8 jako przyczyny niedoboru odporności u myszy z mutagenitem etylotrimocznikowym uzupełnia nasze odkrycia (Cornall R, Goodnow C: komunikacja osobista). HIES składa się z pierwotnych niedoborów odporności, które charakteryzują się ciężką egzemą, nawracającymi infekcjami skóry (często z S. aureus), śluzówkowo-skórną kandydozą, nawracającymi zakażeniami sinopulmonarnymi, podwyższonymi poziomami IgE w surowicy i eozynofilią.6 Autosomalny dominujący HIES wynika z dominujących interferujących mutacji w genie kodujący czynnik transkrypcyjny STAT3. Takie mutacje prowadzą do nieudanego różnicowania wyspecjalizowanej podgrupy pomocniczych limfocytów T, które produkują interleukinę-17 w celu obrony przed grzybiczymi i pozakomórkowymi infekcjami bakteryjnymi.18,29-32 W przeciwieństwie do tego autosomalna recesywna postać zawiera nawracające skórne infekcje wirusowe, ale nie formowanie pneumatocele lub zaburzenie tkanki łącznej i szkieletu.5 Homozygotyczna mutacja powodująca utratę funkcji w genie 2 kinazy tyrozynowej, która koduje czynnik transkrypcyjny TYK2, doprowadziła do upośledzenia sygnalizacji cytokin w wielu szlakach u pojedynczego pacjenta z podwyższonymi poziomami IgE, ale nie w innych pacjenci.33,34 Pacjenci z tymi postaciami HIES charakteryzują się charakterystyczną liczbą limfocytów.5,6,33
Zespół niedoboru odporności DOCK8 stanowi podgrupę pacjentów, którzy mają nieokreślone połączone niedobory odporności lub których wcześniej błędnie zaklasyfikowano jako mających autosomalny recesywny HIES. Oprócz limfopenii niedobór DOCK8 ma objawy, które nie były wcześniej związane z HIES, w tym nowotwory związane ze skórnymi infekcjami wirusowymi. Continue reading „Połączony niedobór odporności związany z mutacjami DOCK8 ad 8”

Połączony niedobór odporności związany z mutacjami DOCK8 ad 7

Ten wynik nie był spowodowany niską wyjściową liczbą limfocytów T CD8, ponieważ liczba komórek nie wzrosła, gdy zostały znormalizowane do numeru początkowego. Co więcej, rozcieńczenie CFSE, markera podziału komórkowego, było upośledzone w komórkach T CD8 z niedoborem DOCK8 po stymulacji receptorów komórek T przeciwciałami anty-CD3 plus anty-CD28 (Figura 4B i Fig. 8C w Dodatku Aneks). Przeciwnie, nie zaobserwowaliśmy żadnego defektu w proliferacji limfocytów T CD4 (ryc. 8B, 8C i 8D w dodatkowym dodatku). Continue reading „Połączony niedobór odporności związany z mutacjami DOCK8 ad 7”

Nieswoiste zapalenie jelit i mutacje wpływające na receptor interleukiny-10 ad 8

Interleukina-10 zasadniczo zmniejszała uwalnianie TNF-. w komórkach od osobników kontrolnych. Ten efekt hamujący był nieobecny w komórkach od Pacjenta II-3, który nosił mutację IL10RB W159X (Figura 4A); Pacjent II-5, który nosił mutację IL10RA G141R (Figura 4B i 4C); oraz niespokrewnionego dodatkowego pacjenta, który nosił mutację IL10RA T84I (ryc. 2K w dodatkowym dodatku). Aby ocenić, czy LPS indukowało przedłużone wydzielanie innych prozapalnych cytokin w PBMC z niedoborem IL10R1, wykorzystaliśmy analizę macierzy białek do pomiaru supernatantów PBMC stymulowanych LPS. Continue reading „Nieswoiste zapalenie jelit i mutacje wpływające na receptor interleukiny-10 ad 8”

Nieswoiste zapalenie jelit i mutacje wpływające na receptor interleukiny-10 ad 7

Zgodnie z oczekiwaniem, fosforylacja STAT3 została zniesiona przy tyrozynie 705, ale nie miała wpływu na serynę 727 w komórkach od pacjenta, w porównaniu z komórkami od osobnika kontrolnego (Figura 3H). Aby potwierdzić te odkrycia, koeksprymowaliśmy białko IL10R1 typu dzikiego lub z mutacją G141R, wraz z IL10R2 typu dzikiego, w komórkach HeLa ujemnych względem IL10R. Koekspresja IL10R1 typu dzikiego i IL10R2 typu dzikiego skutkowała fosforylacją STAT3 na sygnalizacji interleukiny-10. Przeciwnie, koekspresja zmutowanego IL10R1 G141R i IL10R2 typu dzikiego nie spowodowała fosforylacji STAT3 po ekspozycji na interleukinę-10 (Figura 3I). Wpływ na sygnalizację interleukiny-10
Figura 4. Continue reading „Nieswoiste zapalenie jelit i mutacje wpływające na receptor interleukiny-10 ad 7”

Nieswoiste zapalenie jelit i mutacje wpływające na receptor interleukiny-10 ad 6

Panel I przedstawia analizę Western blot fosforylacji STAT3 na tyrozynie 705 w komórkach HeLa stymulowanych interleukiną-10, które były transdukowane retrowirusowo IL10R2 typu dzikiego razem z IL10R1 typu dzikiego lub IL10R1 ze zmutowanym G141R. Dehydrogenaza aldehydu glicerynowo-3-fosforanowego (GAPDH) została użyta jako kontrola do doświadczeń w panelach C, D, H i I. Przeanalizowaliśmy działanie funkcjonalne implikowanych mutacji. Analiza sortowania komórek aktywowana fluorescencją (FACS) ujawniła brak ekspresji IL10R2 w komórkach B transformowanych Eppen-Barr (EBV) uzyskanych od Pacjenta II-3 w Rodzinie A, który nosił homozygotyczną mutację W159X w IL10RB, w przeciwieństwie do silnego IL10R2. ekspresja w komórkach od osobnika niezmienionego (Figura 3A) .31 Figura 3B pokazuje lokalizację mutacji W159X w białku IL10R2. Continue reading „Nieswoiste zapalenie jelit i mutacje wpływające na receptor interleukiny-10 ad 6”

Nieswoiste zapalenie jelit i mutacje wpływające na receptor interleukiny-10 ad 5

Mutacja była nieobecna u 100 niewrażliwych osób arabskich i 30 niewrażliwych osób z Iranu. Sekwencjonowaliśmy IL10RA i IL10RB u sześciu dodatkowych pacjentów, u których wystąpił ciężki stan zapalny okrężnicy w pierwszym roku życia i zidentyfikowaliśmy homozygotyczną mutację missense w eksonie 3 IL10RA (c.C325T, p.Thr84Ile) u jednego niemieckiego pacjenta o europejskim pochodzeniu ( Ryc. 2C w dodatku uzupełniającym). Pacjent, który miał 8 miesięcy, otrzymał rozpoznanie ciężkiej postaci trzustki w wieku 3 miesięcy (ryc. 2D, 2E i 2F w Dodatku uzupełniającym). Continue reading „Nieswoiste zapalenie jelit i mutacje wpływające na receptor interleukiny-10 ad 5”

Nieswoiste zapalenie jelit i mutacje wpływające na receptor interleukiny-10 czesc 4

Pięć markerów wykazało doskonałą segregację z fenotypem (odpowiadającym logarytmowi wyniku LOD około 2,0) i było zlokalizowane na chromosomach 2, 7, 14, 19 i 21. Dokładne mapowanie z dodatkowymi mikrosatelitami wykazało, że trzy z tych markerów znajdowały się w przedziałach, które doskonale dzieliły się z fenotypem choroby i obejmowały wiele megabitów. Tabela S1 w Dodatku uzupełniającym podsumowuje zakres tych odstępów; minimalny interwał został zdefiniowany przez dwa najbardziej oddalone flankujące, doskonale segregujące markery, a maksymalny przedział określono przez rozciąganie, w każdym kierunku, pierwszego markera, który nie perfekcyjnie dzielił się z fenotypem choroby. Geny, które znajdowały się w tych odstępach czasowych i geny, które zsekwencjonowaliśmy (jeden gen na chromosomie 7 i cztery geny na chromosomie 21) wymieniono w tabeli S2 w dodatkowym dodatku. Skupiliśmy się na interwale chromosomu 21, ponieważ zawierał on więcej genów niż pozostałe dwa połączone kombinacje i bardziej funkcjonalne geny kandydujące, w tym rodzinę genów związanych z interferonem. Continue reading „Nieswoiste zapalenie jelit i mutacje wpływające na receptor interleukiny-10 czesc 4”

Reforma Medicaid i National Health Reform ad

Trzy główne wnioski w sprawie reform, które są obecnie w toku, wyeliminują kategoryczne ograniczenia Medicaid dotyczące zasięgu nieeleganckich dorosłych, jednocześnie ustanawiając krajowy standard kwalifikowalności powiązany z federalnym poziomem ubóstwa (patrz tabela). Szacunki z lipca 2009 r. Przygotowane przez Kongresowe Biuro Budżetowe (CBO) na rachunek House a wskazują, że do 2019 r. Ekspansja Medicaidów przy kosztach 10-letnich wyniosłaby 438 miliardów dolarów, osiągając dodatkowe 11 milionów ludzi – prawie 25% liczby osób, które byli nieubezpieczeni w 2008 r. i prawie jedna trzecia z 35 milionów osób, które uzyskałyby pokrycie w ramach ustawy o reformie służby zdrowia w Izbie Gospodarczej. Continue reading „Reforma Medicaid i National Health Reform ad”

Reforma Medicaid i National Health Reform

Zdefiniowany przez historię zarówno osiągnięć, jak i kontrowersji, Medicaid ponownie stał się centralnym punktem debaty na temat polityki zdrowotnej USA, tym razem jako klucz do reformy krajowej służby zdrowia. Od momentu powstania Medicaid był wielokrotnie wzywany, aby zrekompensować niedociągnięcia rynkowego systemu ubezpieczeń zdrowotnych, który wyklucza osoby ubogie i chore. Niezależnie od tego, czy celem było ubezpieczenie ubogich dzieci i kobiet w ciąży, umożliwienie osobom niepełnosprawnym osiągnięcia integracji społecznej, leczenie nieubezpieczonych kobiet z powodu raka piersi lub szyjki macicy lub zrekompensowanie niedociągnięć Medicare w zapewnianiu opieki osobom w podeszłym wieku, Medicaid był remedium zarówno wybór, jak i konieczność. Finansowane wspólnie przez federalne i stanowe rządy, Medicaid wyrosło na najpotężniejszego ze wszystkich amerykańskich ubezpieczycieli zdrowotnych, obejmując prawie 60 milionów ludzi w 2005 r., Przy średniej składce federalnej w wysokości 57% kosztów pomocy medycznej państw.1 Chociaż federalne finansowanie Medicaid jest olbrzymie , stwierdza nieustannie walka finansowo, ponieważ rosnące koszty opieki zdrowotnej znacznie przewyższają ich wzrost gospodarczy. Problemy pogłębiły się w czasie obecnej recesji, biorąc pod uwagę zarówno malejące przychody, jak i wzrost rekrutacji2. Continue reading „Reforma Medicaid i National Health Reform”