Nieswoiste zapalenie jelit i mutacje wpływające na receptor interleukiny-10 ad 8

Interleukina-10 zasadniczo zmniejszała uwalnianie TNF-. w komórkach od osobników kontrolnych. Ten efekt hamujący był nieobecny w komórkach od Pacjenta II-3, który nosił mutację IL10RB W159X (Figura 4A); Pacjent II-5, który nosił mutację IL10RA G141R (Figura 4B i 4C); oraz niespokrewnionego dodatkowego pacjenta, który nosił mutację IL10RA T84I (ryc. 2K w dodatkowym dodatku). Aby ocenić, czy LPS indukowało przedłużone wydzielanie innych prozapalnych cytokin w PBMC z niedoborem IL10R1, wykorzystaliśmy analizę macierzy białek do pomiaru supernatantów PBMC stymulowanych LPS. Continue reading „Nieswoiste zapalenie jelit i mutacje wpływające na receptor interleukiny-10 ad 8”

Nieswoiste zapalenie jelit i mutacje wpływające na receptor interleukiny-10 ad 7

Zgodnie z oczekiwaniem, fosforylacja STAT3 została zniesiona przy tyrozynie 705, ale nie miała wpływu na serynę 727 w komórkach od pacjenta, w porównaniu z komórkami od osobnika kontrolnego (Figura 3H). Aby potwierdzić te odkrycia, koeksprymowaliśmy białko IL10R1 typu dzikiego lub z mutacją G141R, wraz z IL10R2 typu dzikiego, w komórkach HeLa ujemnych względem IL10R. Koekspresja IL10R1 typu dzikiego i IL10R2 typu dzikiego skutkowała fosforylacją STAT3 na sygnalizacji interleukiny-10. Przeciwnie, koekspresja zmutowanego IL10R1 G141R i IL10R2 typu dzikiego nie spowodowała fosforylacji STAT3 po ekspozycji na interleukinę-10 (Figura 3I). Wpływ na sygnalizację interleukiny-10
Figura 4. Continue reading „Nieswoiste zapalenie jelit i mutacje wpływające na receptor interleukiny-10 ad 7”

Nieswoiste zapalenie jelit i mutacje wpływające na receptor interleukiny-10 ad 6

Panel I przedstawia analizę Western blot fosforylacji STAT3 na tyrozynie 705 w komórkach HeLa stymulowanych interleukiną-10, które były transdukowane retrowirusowo IL10R2 typu dzikiego razem z IL10R1 typu dzikiego lub IL10R1 ze zmutowanym G141R. Dehydrogenaza aldehydu glicerynowo-3-fosforanowego (GAPDH) została użyta jako kontrola do doświadczeń w panelach C, D, H i I. Przeanalizowaliśmy działanie funkcjonalne implikowanych mutacji. Analiza sortowania komórek aktywowana fluorescencją (FACS) ujawniła brak ekspresji IL10R2 w komórkach B transformowanych Eppen-Barr (EBV) uzyskanych od Pacjenta II-3 w Rodzinie A, który nosił homozygotyczną mutację W159X w IL10RB, w przeciwieństwie do silnego IL10R2. ekspresja w komórkach od osobnika niezmienionego (Figura 3A) .31 Figura 3B pokazuje lokalizację mutacji W159X w białku IL10R2. Continue reading „Nieswoiste zapalenie jelit i mutacje wpływające na receptor interleukiny-10 ad 6”

Nieswoiste zapalenie jelit i mutacje wpływające na receptor interleukiny-10 ad 5

Mutacja była nieobecna u 100 niewrażliwych osób arabskich i 30 niewrażliwych osób z Iranu. Sekwencjonowaliśmy IL10RA i IL10RB u sześciu dodatkowych pacjentów, u których wystąpił ciężki stan zapalny okrężnicy w pierwszym roku życia i zidentyfikowaliśmy homozygotyczną mutację missense w eksonie 3 IL10RA (c.C325T, p.Thr84Ile) u jednego niemieckiego pacjenta o europejskim pochodzeniu ( Ryc. 2C w dodatku uzupełniającym). Pacjent, który miał 8 miesięcy, otrzymał rozpoznanie ciężkiej postaci trzustki w wieku 3 miesięcy (ryc. 2D, 2E i 2F w Dodatku uzupełniającym). Continue reading „Nieswoiste zapalenie jelit i mutacje wpływające na receptor interleukiny-10 ad 5”